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前 言  

       膠原蛋白粉是這些年來比較熱門的食品，內含18種氨基酸，其中羥脯氨酸含量相對較高，所以其含量作為表征膠原蛋白粉的質量高低的一個指標。本文以魚膠原蛋白粉為樣品，帶領大家熟悉國標GBT9695.23-2008羥脯氨酸含量測定流程，并提供一些關鍵注意要點，方便大家以后的應用。

實驗流程

1．稱取魚膠原蛋白粉樣品4g于平底燒瓶中，加入3mol/L硫酸溶液，用表面皿蓋住(沒有的用培養皿蓋上也一樣),放在105℃干燥箱內消解16h。

圖一

2.趁熱用圓形濾紙過濾到250ml容量瓶中，以10ml的3mol/L硫酸溶液分三次洗滌燒瓶和濾紙，合并于容量瓶中，以水定容。剛消解完的樣品（過濾前）大約是深棕色，如圖二:定容后會是淺黃色，如圖三所示。

圖二

圖三

3.移取一定體積水解液（本例取0.2ml）于250ml容量瓶中，以水定容，搖勻。

4.吸取4.00ml樣品溶液于25ml 比色管中，加入2ml氯胺T試劑，迅速混勻，放置20min。

5.再加入2ml顯色劑于比色管中，這時會出現如圖4所示乳白色的分層，這是正常現象，只要快速混勻，就會變成黃色的透明液體。然后用封口膜封住比色管。

圖四

6.將比色管迅速放入60℃水浴中，加熱20min中，取出后會變紅，空白是黃色的，如圖五所示：

圖五

7.迅速冷卻，與室溫放置30min，558nm處測定吸收值，這個方法的標準曲線，線性還是不錯的。

注意事項

1. 標準配置標準曲線取10.00ml,20.00ml,30.00ml,40.00ml標準儲備液到100ml容量瓶，實際工作中取1.00 ml,2.00 ml,3.00 ml,4.00 ml到10ml就可以了，這樣吸取和搖勻都方便。

2. 標準中水解液體積未明確給出，本例取0.2ml適用于羥脯氨酸含量8%-10%魚膠原蛋白粉。如果樣品實際含量不在此范圍，需要自己選擇合適體積，保證*終樣品溶液含有羥脯氨酸濃度在0.5-2.0μg/ml。

3. 氯胺T試劑應該是白色的，稱量時如果是黃色，說明試劑變質了。

4. 氯胺T試劑和顯色劑配好后，至于棕色瓶中，避光，臨用現配。

文章來源：EWG1990儀器學習網