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“唯快不破” SCIEX 7500+系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析
來源:Sciex | 作者:Sciex | 發(fā)布時(shí)間: 2024-08-14 | 1331 次瀏覽 | ?? **朗讀正文 ?? ? | 分享到:
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在2024年美國(guó)質(zhì)譜會(huì)(ASMS)會(huì)議上,生命科學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域的創(chuàng)新者SCIEX推出了SCIEX 7500+系統(tǒng),這是SCIEX定量產(chǎn)品組合中的新款質(zhì)譜儀,延續(xù)了定量可靠靈敏的傳統(tǒng)。該系統(tǒng)為科學(xué)家提供了靈敏度與耐用性的雙重保障。新的應(yīng)用文章表明7500+系統(tǒng)因?yàn)槌斓牟杉俣群挽`敏度,能夠顯著提高高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析的定量準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和對(duì)于脂質(zhì)同分異構(gòu)體的色譜分辨率1。


本文技術(shù)特點(diǎn):


展示了SCIEX 7500+系統(tǒng)下進(jìn)行約2000MRM離子對(duì)的高覆蓋脂質(zhì)掃描的功能和能力。


1. SCIEX 7500+系統(tǒng)具有800 MRM/s的掃描速度,增強(qiáng)了高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)的定量性能;

2. 相較于7500,CV值小于20%的脂質(zhì)分子數(shù)量增加了59% ,提高了方法的穩(wěn)定性;

3. 更快的掃描速度確保分析物色譜峰上的數(shù)據(jù)點(diǎn)更多,從而產(chǎn)生更好的峰形狀,提高了脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率。


背景介紹

脂質(zhì)分析是一個(gè)具有挑戰(zhàn)性的分析過程。首先脂質(zhì)數(shù)量眾多,約有大于>150,000個(gè)脂質(zhì);其次生物體內(nèi)不同脂質(zhì)含量差異大,含量跨度可達(dá)10-12個(gè)數(shù)量級(jí);脂質(zhì)結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣,且目前標(biāo)準(zhǔn)品不全。質(zhì)譜法由于其靈敏度高、特異性強(qiáng)、定量范圍寬等技術(shù)優(yōu)勢(shì),是目前用于脂質(zhì)分析的主流技術(shù)。


SCIEX新推出的7500+三重四極桿質(zhì)譜,提高了離子傳輸效率,實(shí)現(xiàn)采集速度的大幅度提升;同時(shí)兼具高靈敏度、快速極性切換和定量線性范圍寬等優(yōu)勢(shì)。在此技術(shù)上,開發(fā)了可以定性和定量約2000種脂質(zhì)分子的高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析方法。方法使用HILIC色譜進(jìn)行分離,可有效減小脂質(zhì)共流出,避免共流出組分的相互影響。掃描速度的提升不僅可以帶來更多的掃描點(diǎn)數(shù)從而提升定量的準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性,并且得到更好的峰形狀,提高了脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率。


采集方法


色譜使用Phenomenex Luna? NH2 (100 x 2.1 mm, 2.6 μm)色譜柱. 流動(dòng)相A為二氯甲烷和乙腈(7/93, v/v),流動(dòng)相B為二氯甲烷和乙腈(50/50, v/v,含2mM乙酸銨)。

質(zhì)譜基于多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描模式高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)分析方法,使用 scheduled MRM (sMRM) 模式正負(fù)離子同時(shí)掃描,檢測(cè)1925種脂質(zhì),其中正離子模式下822種,負(fù)離子模式下1103種。


結(jié)果與討論


1. 使用SCIEX 7500+系統(tǒng)進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析提高了準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性

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使用SCIEX 7500+系統(tǒng),儀器的MRM功能的快速采集速率可以實(shí)現(xiàn)每秒多達(dá)800個(gè)MRM轉(zhuǎn)換的分析。如上圖所示,SCIEX 7500系統(tǒng)在5ms的采集速度下,2種PE分子僅僅采集到1個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。隨著儀器在使用7500+系統(tǒng)時(shí),隨著掃描速度的提高,獲取的數(shù)據(jù)點(diǎn)數(shù)量也隨之增加。在3ms掃描速度下,采集到了5個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn),而在1.2 ms掃描速度下,采集到了8個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)。有效地改進(jìn)了峰形,提高了定量分析的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度。這一觀察結(jié)果表明,快速的MRM掃描速度對(duì)大規(guī)模的高覆蓋靶向組學(xué)分析至關(guān)重要。


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不同脂質(zhì)峰面積的定量的CV統(tǒng)計(jì)也表示采集度對(duì)于高覆蓋靶向組學(xué)分析的重要性。上圖顯示了5種不同脂類的示例分析物峰,計(jì)算了5次連續(xù)進(jìn)樣峰面積CV值。在不同掃描速度下,以3ms掃描速度分析的各分析物的CV值低。在使用5 ms掃描速度的實(shí)驗(yàn)中,分析物峰上收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)較少,導(dǎo)致一些分析物的峰形失真,導(dǎo)致CV值變大。因此,更快的MRM掃描速度提高了準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性,**的7500+系統(tǒng)結(jié)合自動(dòng)化的分析軟件提供了更實(shí)用高覆蓋靶向組學(xué)解決方案。


2. 使用SCIEX 7500+系統(tǒng)進(jìn)行脂質(zhì)組學(xué)分析提高了脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率。

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圖A為1-和2-lysoPC(18:1)的4個(gè)采集速度的XIC。如藍(lán)色所示,在1.2 ms掃描速度下獲得的數(shù)據(jù)顯示為異構(gòu)體的兩個(gè)不同的峰。隨著掃描速度的降低,在兩個(gè)峰上采集的數(shù)據(jù)點(diǎn)也隨之減少。在5 ms的掃描速度下(綠色),兩個(gè)不同的峰不再被色譜分辨,于是丟失了脂質(zhì)異構(gòu)體的定量信息。

圖B所顯示的上一行的XIC上異構(gòu)體1-lysoPC(16:0)為主要峰,前面的小峰為異構(gòu)體2-lysoPC(16:0)。在5 ms的掃描速度下,兩個(gè)異構(gòu)體之間的分離消失了。lysoPC(18:1)也有類似的情況存在(圖B下一行)。在5 ms的掃描速度下,收集的數(shù)據(jù)點(diǎn)太少,無法確定是否存在異構(gòu)體。隨著掃描速度的提升,采集點(diǎn)數(shù)也隨之提升,于是異構(gòu)體得以被分辨。同時(shí)結(jié)果顯示較慢的掃描速度導(dǎo)致分析物CV也顯著更高,會(huì)產(chǎn)生顯著的定量誤差。因此使用SCIEX 7500+系統(tǒng)進(jìn)行快速采集的脂質(zhì)組學(xué)分析提高了脂質(zhì)異構(gòu)體的色譜分辨率。

結(jié)論

與傳統(tǒng)非靶脂質(zhì)組學(xué)方法相比,靶向脂質(zhì)組學(xué)分析脂質(zhì)使用簡(jiǎn)便、靈敏度高,并且能夠準(zhǔn)確地識(shí)別和量化脂質(zhì),高覆蓋的靶向組學(xué)分析被越來越多地監(jiān)測(cè)生物樣品中的代謝和脂質(zhì)。以上這些結(jié)果表明,SCIEX 7500+系統(tǒng)可以提高方法的準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和脂質(zhì)異構(gòu)體分辨率,同時(shí)增加脂質(zhì)測(cè)定的覆蓋范圍,整體提升高覆蓋靶向脂質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)質(zhì)量。


1. Fast scanning quantitative lipidomics analysis using the SCIEX 7500+ system. 2024 SCIEX TN: MKT-32067-A.



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