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沃特世RNA分析工具再升級(jí)，MAP Sequence 2.0助力mRNA及sgRNA序列分析

近年來，長(zhǎng)鏈RNA治療藥物和疫苗（如CRISPR sgRNA、mRNA）發(fā)展迅速，其長(zhǎng)度可達(dá)數(shù)百至數(shù)千個(gè)核苷酸。由于僅靠完整質(zhì)量分析難以**評(píng)估其特性，需采用酶切策略確認(rèn)序列并檢測(cè)修飾。

近年來，以長(zhǎng)鏈RNA為基礎(chǔ)的治療藥物（CRISPR sgRNA、mRNA）和疫苗發(fā)展迅速，這類RNA的核苷酸長(zhǎng)度從100個(gè)到數(shù)千個(gè)不等，與長(zhǎng)度相近的蛋白質(zhì)類似，僅通過完整質(zhì)量分析無法**了解其特性。需要借助基于酶切的策略來確認(rèn)序列，并評(píng)估靶向修飾和非預(yù)期修飾。

**的MAP Sequence 2.0 App能夠通過LC-MS分析寡核苷酸序列圖譜，確認(rèn)長(zhǎng)鏈RNA分子的完整性、線性序列和修飾情況。用戶通過序列特異性RNase酶對(duì)RNA進(jìn)行酶切，生成可預(yù)測(cè)的酶切寡核苷酸產(chǎn)物后，可通過LC-MS^E對(duì)這些酶切寡核苷酸進(jìn)行分析，構(gòu)建寡核苷酸圖譜。這一過程類似于酶切蛋白質(zhì)后的肽圖分析。而MAP Sequence信息學(xué)工具會(huì)利用質(zhì)量和碎片信息，將圖譜中的峰與酶切片段進(jìn)行匹配。

圖1. 使用MAP Sequence 2.0版比較sgRNA經(jīng)三種酶（RapiZyme Cusativin、RapiZyme MC1和RNase T1）酶解后獲得的序列覆蓋率。合并序列覆蓋率表明，通過工作流程中概述的復(fù)合酶解方法，可以實(shí)現(xiàn)沃特世sgRNA的完整序列表征。

MAP Sequence 2.0 App具有以下優(yōu)勢(shì)功能：

能夠原生處理來自 BioAccord、Xevo G3 QTof和Xevo MRT系統(tǒng)的數(shù)據(jù)，可以根據(jù)自身對(duì)可用性、靈敏度和質(zhì)量準(zhǔn)確度的需求選擇合適的平臺(tái)。

具備整合多次圖譜分析結(jié)果，和靈活支持多種酶切策略的能力，為實(shí)現(xiàn)高可信度的高序列覆蓋率提供了較大可能。

提供多種用于數(shù)據(jù)審查和報(bào)告的數(shù)據(jù)及結(jié)果可視化工具，能夠清晰、簡(jiǎn)潔地呈現(xiàn)圖譜中單個(gè)酶切寡核苷酸的結(jié)果，以及整個(gè)分子圖譜的匯總結(jié)果。

搭載在waters_connect質(zhì)譜軟件平臺(tái)，作為一款合規(guī)軟件，waters_connect可部署于產(chǎn)品及工藝研發(fā)階段的RNA表征工作，也可用于構(gòu)建經(jīng)驗(yàn)證的常規(guī)分析方法，在受監(jiān)管的生產(chǎn)與產(chǎn)品放行流程中監(jiān)控這些關(guān)鍵屬性。